Obwodowe obwody otyłości FTO i brązowienie adipocytów u ludzi cd 8

Zmiana pojedynczego nukleotydu T-to-C zwiększała poziomy aktywności wzmacniacza dla segmentów 10 kb i kb wyśrodkowanych na wariancie, zarówno w orientacji, jak i w górę i w dół od początku transkrypcji, co wskazywało na wzrost aktywności wzmacniacza w asocjacji. z allelem ryzyka rs1421085 (ryc. S6C i S6D w dodatkowym dodatku). Aby ocenić wpływ wariantu na wiązanie regulatora, wykorzystano analizę ruchliwości elektroforetycznej (EMSA) ekstraktu jądrowego adipocytów z sondami dla allelu ryzyka i allelu bez ryzyka rs1421085. Znaleźliśmy wiązanie dla allelu bez markera T, który nie posiadał aktywności wzmacniacza, ale nie wiązało się z allelem ryzyka, C; wskazało to, że zwiększona aktywność wzmacniacza powiązana z allelem ryzyka jest prawdopodobnie spowodowana utratą wiązania represora, a nie wzmocnieniem wiązania aktywatora (Fig. S6E w Dodatku Uzupełniającym).
Przeanalizowaliśmy przerywane motywy i ekspresję regulatora, aby zidentyfikować potencjalne regulatory wstępne. Podstawienie T-to-C przerwał konserwatywne motywy dla rodziny NKX6-3, LHX6 i rodziny ARID regulatorów (Figura 4A). Wśród nich ARID5B miał najwyższą ekspresję w tkance tłuszczowej i adipocytach i był związany specyficznie z allelem nieryzynowym w eksperymentach konkursowych EMSA (Ryc. S6E i S6F w Dodatku Uzupełniającym). Wiadomo, że ARID5B odgrywa rolę zarówno represyjną, jak i aktywującą i był wcześniej zaangażowany w adipogenezę i metabolizm lipidów u myszy.27,28. Wśród nosicieli alleli bez markera ekspresja ARID5B była ujemnie skorelowana z ekspresją IRX3 i IRX5, co było zgodne z ARID5B mającym rolę represyjną. Nie znaleziono korelacji w nośnikach alleli ryzyka, co wskazuje na utratę regulacji ARID5B (ryc. S6G w dodatku uzupełniającym).
Aby ocenić przyczynową rolę ARID5B, zbadaliśmy następnie wpływ jego knockdown i nadekspresji na IRX3 i IRX5. Zwalnianie ARID5B zwiększało ekspresję IRX3 i IRX5 w pierwotnych preadipocytach od nosicieli alleli bez ryzyka do poziomów allelu ryzyka, co wskazuje na utratę represji, ale nie miało wpływu na preadipocyty z nosicieli ryzyka-allel, co wskazuje na epistazę z haplotypem związanym z otyłością (Rys. S6H w Dodatku Uzupełniającym). Zgodnie z tym odkryciem, w testach wzmacniacza SGBS, obniżenie ARID5B zwiększyło aktywność preadipocytów z allelem bez ryzyka na poziom allelu ryzyka, co wskazuje na utratę represji, ale nie miało wpływu na konstrukty alleli ryzyka, co wskazuje na epistazę z ryzykiem rs1421085 allel (ryc. S6I w dodatkowym dodatku). Nadekspresja ARID5B dalej zmniejszała poziomy IRX3 i IRX5 w nośnikach z allelem nie-markera, co wskazywało, że represja została wzmocniona, ale nie miała znaczącego wpływu na nosiciele ryzyka-allele, co jest zgodne z zaburzoną represją ARID5B w połączeniu z haplotypem ryzyka (Fig. S6J in Dodatek dodatkowy).
Oceniliśmy również wpływ komórkowy zaburzeń kierowanych przez ARID5B w pierwotnych preadipocytach z nosicieli alleli ryzyka i nosicieli alleli bez markera. W preadipocytach z nosicieli alleli bez markera, obniżenie ARID5B zmniejszyło podstawowe zużycie tlenu i lipolizę (ryc. S6K i S6L w dodatkowym dodatku) i przesunięte wzorce ekspresji z markerów mitochondrialnych na lipidowe (ryc.
[patrz też: Laserowe usuwanie blizn, serum do rzęs, sztuczne rzęsy ]

Powiązane tematy z artykułem: Laserowe usuwanie blizn serum do rzęs sztuczne rzęsy