Mutacja HABP2 w linii komórkowej wywołująca rodzinnego nieswoistego raka tarczycy..

Pacjenci wyrazili pisemną zgodę przed poddaniem ocenie i testom. Badania genetyczne
Przeprowadziliśmy wysokoprzepustowe sekwencjonowanie próbek DNA z krwi obwodowej z rodzinnego po wychwyceniu całego egzomu (szczegóły można znaleźć w Dodatkowym dodatku, dostępnym wraz z pełnym tekstem tego artykułu). Sekwencjonowanie Sangera zastosowano do walidacji wariantów zidentyfikowanych przez sekwencjonowanie całego egzomu u dotkniętych i nie dotkniętych chorobą członków rodziny.
Mutageneza i transfrakcje ukierunkowane na miejsce
Wytworzyliśmy rekombinowanego mutanta G534E przez ukierunkowaną mutagenezę komplementarnego DNA typu dzikiego i przeprowadzono transfekcje w celu ustalenia stabilnego raka tarczycy i linii komórkowych HEK293 (szczegóły, patrz Suplement Dodatek). Przeprowadziliśmy eksperymenty knockdown przy użyciu małego interferującego RNA (siRNA) kierującego do HABP2; Transfekcje siRNA przeprowadzono przy użyciu odczynnika do transfekcji Lipofectamine RNAiMAX (Life Technologies), jak opisano w dodatkowym dodatku.
Badania funkcjonalne
Przeprowadziliśmy testy klonogeniczne i migrację komórek przy użyciu ustalonych linii komórkowych typu dzikiego i ekspresjonujących G534E, z przejściowym knockdown HABP2 typu dzikiego. Do testów transformacji komórkowej wykorzystano mysią linię komórkową fibroblastów NIH-3T3. Aby określić możliwe dominujące negatywne działanie wariantu, przeprowadziliśmy test foci z przejściową transfekcją równych ilości konstruktów dzikiego typu i zmutowanych.
Wyniki
Identyfikacja HABP2 jako genu podatności na kandydata
Przeprowadziliśmy sekwencjonowanie całego ekscesu za pomocą DNA z krwi obwodowej od członków rodziny dotkniętych chorobą i niewinnych małżonków, aby zidentyfikować kandydujące warianty pojedynczych nukleotydów oraz insercje i delecje, które dzieliły się ze wszystkimi dotkniętymi chorobą członkami, ale nie były obecne u niezmienionych małżonków. Korzystając z kryteriów filtrowania (Tabela S1 w Uzupełniającym dodatku), zidentyfikowaliśmy dwa pojedyncze warianty nukleotydów, które były obecne tylko u członków rodziny dotkniętej chorobą, bez wstawiania lub delecji. Potwierdziliśmy te dwa niesynonimiczne warianty pojedynczego nukleotydu przy użyciu sekwencjonowania Sangera. Wybraliśmy HABP2 jako gen kandydujący, ponieważ wariant pojedynczego nukleotydu w eksonie 13 segreguje ze wszystkimi siedmioma członami dotkniętymi chorobą, w tym z czterema, u których rozpoznano raka tarczycy na podstawie badania przesiewowego (Figura 1A i Tabela 1). Wariant HABP2 powoduje podstawienie G . A przy podstawie 1601, ze zmianą aminokwasu z glicyny na glutaminian w pozycji 534 (G534E). Wszyscy dotknięci członkowie rodziny byli heterozygotyczni pod względem tego wariantu w DNA krwi obwodowej (Figura 1A i 1B). Wariant G534E jest obecny w obrębie domeny trypsyny proteazy serynowej białka HABP2 i jest wysoce konserwatywnym miejscem nie tylko w HABP2, ale także w innych białkach zawierających domenę proteazy serynowej, takich jak aktywator czynnika wzrostowego hepatocytów i czynnik XII, które mogą odgrywać rolę. rola w raku (Figura 1C) .9,10
W celu określenia możliwego działania wariantu HABP2 G534E przeprowadziliśmy modelowanie homologiczne domeny trypsyny proteazy serynowej i stwierdziliśmy, że podstawienie glicyną do glutaminianu spowodowało ograniczenie przestrzeni w pobliżu regionu katalitycznego, tym samym zaburzając miejsce aktywne i dostępność powierzchniową jego substraty (rysunek 1E, 1F i 1G).
Następnie badaliśmy ekspresję HABP2 w próbkach tkanki tarczycy w przypadkach rodzinnych i sporadycznych
[patrz też: Depilacja laserowa, wyposażenie taktyczne, przedłużanie rzęs ]

Mutacja HABP2 w linii komórkowej wywołująca rodzinnego nieswoistego raka tarczycy.

Nasze wyniki sugerują, że HABP2 jest genem podatności na raka tarczycy pochodzenia komórek pęcherzykowych. Opis przypadku
Rysunek 1. Rysunek 1. Identyfikacja i ekspresja wariantu G534E HABP2.Panel A przedstawia rodowód rodowy, status w odniesieniu do nieswoistego raka tarczycy i genotypu HABP2 dla każdej mutacji heterozygotycznej (G534E). Kwadraty oznaczają męskich członków rodziny, okręgi żeńskich członków, zacienione symbole dotkniętych członków i tnie zmarłych członków; strzałka wskazuje na proband (pacjent II.2). Panel B pokazuje chromatogram sekwencji normalnego i zmutowanego genomu. Panel C pokazuje architekturę domeny białkowej HABP2 i zachowanie pozycji G534 w różnych gatunkach. (więcej…)

Mutacja HABP2 w linii komórkowej wywołująca rodzinnego nieswoistego raka tarczycy

Rodzinny nieswokarty rak tarczycy stanowi od 3 do 9% wszystkich przypadków raka tarczycy, ale geny podatności nie są znane. Tutaj przedstawiamy wariant linii zarodkowej HABP2 u siedmiu pacjentów dotkniętych chorobą z rodzinną nieswoistą rakiem tarczycy oraz u 4,7% z 423 pacjentów z rakiem tarczycy. Ten wariant był związany ze zwiększoną ekspresją białka HABP2 w próbkach nowotworu od dotkniętych członków rodziny, w porównaniu z normalną sąsiadującą tkanką tarczycową i próbkami ze sporadycznych nowotworów. Badania funkcjonalne wykazały, że HABP2 ma działanie hamujące rozwój guza, podczas gdy wariant G534E powoduje utratę funkcji.
Wprowadzenie
Rak tarczycy jest powszechny w Stanach Zjednoczonych, a ponad 62 000 przypadków jest prognozowanych w 2015 roku. Raki tarczycy pochodzenia komórek jajowych stanowią ponad 95% wszystkich przypadków raka tarczycy, a pozostałe nowotwory pochodzą z komórek parafolikularnych (rak rdzeniasty tarczycy ). Rodzinny nieswokarty rak tarczycy, który stanowi od 3 do 9% wszystkich przypadków raka tarczycy, ma autosomalny dominujący wzór dziedziczenia.1,2 Może być syndromiczny, występujący jako składnik jednego z rodzinnych zespołów nowotworowych (rodzinna gruczolakowata polipowatość Zespół Gardnera, choroba Cowdena, kompleks Carneya typu 1, zespół Wernera i zespół DICER1), dla których genów podatności są znane, lub może występować jako jedyny rak (niedotlenienie) .3 Niesymetryczny rodzinny nieswoisty rak tarczycy ponad 95% wszystkich przypadków rodzinnego nieswoistego raka tarczycy.2 Większość przypadków rodzinnego nieswoistego raka tarczycy to rak brodawkowaty tarczycy, który jest najczęstszym typem raka tarczycy. (więcej…)

Powiązane tematy z artykułem: frezy do paznokci odzież medyczna odżywki do rzęs