Mutacja HABP2 w linii komórkowej wywołująca rodzinnego nieswoistego raka tarczycy cd..

Analiza immunohistochemiczna wykazała zwiększoną ekspresję białka HABP2 w brodawkowatych raku tarczycy i guzach gruczolaka pęcherzykowego z dotkniętych członków, ale nie było wybarwienia w normalnej tkance tarczycy od tych samych dotkniętych członków (Figura 1H, 1I i 1J). W przeciwieństwie do tego, stwierdziliśmy, że tylko 3 z 12 sporadycznych brodawkowatych raków tarczycy miało słabe wybarwianie białka HABP2 (Figura 1K). Przeanalizowaliśmy także ekspresję HABP2 w matrycowym RNA i stwierdziliśmy, że jest silnie wyrażana w tkance guza, w porównaniu z sąsiadującą prawidłową tkanką tarczycy (Figura 1D). Ekspresję białka HABP2 opisano w 9 z 82 prawidłowych typów tkanek.11 Zatem nadekspresja HABP2 w nowotworach z nośników wariantu G534E sugerowała możliwą rolę patogenu. Sekwencjonowaliśmy regiony kodujące (eksony do 13) HABP2 w DNA krwi obwodowej od wszystkich dotkniętych członków próbek krewnych i nowotworowych DNA od czterech dotkniętych członków. Stwierdziliśmy, że wariant jest heterozygotyczny zarówno w DNA linii zarodkowej, jak i nowotworowej (Figura 1B). Sekwencjonowanie Sanger nie wykryło żadnych innych nieprawidłowości w regionie kodującym HABP2, które sugerowałyby zmianę innego allelu HABP2 w tkance nowotworowej. Ponadto analiza liczby kopii w tkance guza wykazała brak zmiany liczby kopii w porównaniu z sąsiadującą normalną tkanką (ryc. S3 w dodatku uzupełniającym). Nie znaleźliśmy również mutacji somatycznych lub znanych rearanżacji w BRAF, KRAS, NRAS lub RET / PTC1 i RET / PTC3 w próbkach guza (Tabela 1). Analiza bazy danych raka genomu raka (TCGA) dla stanu mutacji somatycznych HABP2 wykazała wskaźniki mutacji do 6% (ryc. S4 w dodatku uzupełniającym).
Rola HABP2 w raku tarczycy
Figura 2. Figura 2. Funkcjonalna charakterystyka HABP2.Panel A pokazuje tworzenie kolonii i migrację komórek z przejściowym knockdown HABP2 typu dzikiego w trzech różnych liniach komórkowych (FTC133, TPC1 i HEK293); siRNA oznacza mały interferujący RNA, a kodowany oznacza sekwencję antysensownego RNA, która ma taką samą zawartość molową każdej zasady, jak siRNA HAPB2, ale w sekwencji losowej, która nie jest komplementarna do autentycznego HAPB2. Panel B pokazuje tworzenie kolonii i migrację komórek w trzech liniach komórkowych ze stabilną nadekspresją HABP2 typu dzikiego (WT) i G534E. Panel C pokazuje tworzenie się ognisk i migrację komórek mysich fibroblastów NIH-3T3 z przejściową nadekspresją HABP2 G534E typu dzikiego. Jedna gwiazdka oznacza P <0,05, dwie gwiazdki oznaczają P <0,01, a trzy gwiazdki oznaczają P <0,001; T bary oznaczają odchylenie standardowe.
Następnie testowaliśmy hipotezę, że HABP2 działa jako gen supresorowy lub onkogen. Eksperymentalne knockdown HABP2 typu dzikiego zwiększyło tworzenie kolonii i migrację komórkową, co sugeruje funkcję supresyjną guza (Figura 2A). Stabilna nadekspresja HABP2 typu dzikiego w liniach komórkowych zmniejszała tworzenie kolonii i migrację komórkową (Figura 2B). Przeciwnie, nadekspresja wariantu G534E zwiększała tworzenie kolonii, w porównaniu z kontrolą typu dzikiego i wektora pustego. Aby sprawdzić, czy wariant G534E może doprowadzić do transformacji komórkowej, przejściowo nadeksprymowaliśmy HABP2 typu dzikiego i wariant G534E w linii komórkowej mysiej fibroblastów NIH-3T3 i przeprowadziliśmy test foci
[więcej w: chirurgiczne usuwanie ósemek, zagęszczanie rzęs cena, long 4 lashes ]

Powiązane tematy z artykułem: chirurgiczne usuwanie ósemek long 4 lashes zagęszczanie rzęs cena